พลาสมิด recombinant คืออะไร?

พลาสมิดเป็นชิ้นส่วนของ DNA ที่พบได้ในแบคทีเรียหลายชนิดคุณสมบัติที่โดดเด่นที่สุดของพลาสมิดคือพวกเขาทำซ้ำโดยอิสระจาก DNA หลักของโฮสต์บ่อยครั้งที่พลาสมิดถูกใช้ในเทคโนโลยีการโคลนนิ่ง recombinant เพื่อโคลนยีนที่แยกได้ใหม่นอกจากนี้ยังเป็นเรื่องธรรมดามากที่จะใช้พลาสมิด recombinant เพื่อแสดงยีนที่รู้จักจำนวนมากเพื่อให้ได้ RNA หรือโปรตีนจากมันการแสดงออกของยีน recombinant ดังกล่าวเป็นสิ่งที่ขาดไม่ได้สำหรับอุตสาหกรรมเทคโนโลยีชีวภาพ

recombinant plasmids ได้รับการพัฒนาเป็นครั้งแรกในแล็บหนูของโลกแบคทีเรีย Escherichia coli แบคทีเรียชนิดอื่น ๆ อีกมากมายสามารถปิดกั้นพลาสมิดดังกล่าวได้บิตของ DNA ที่จำลองตัวเองเหล่านี้สามารถถ่ายโอนตามธรรมชาติระหว่างแบคทีเรียชนิดต่าง ๆอย่างไรก็ตามเรื่องนี้บางครั้งก็ยากที่จะแนะนำพลาสมิด recombinant ให้เป็นแบคทีเรียชนิดอื่น

ขั้นตอนหลักสำหรับการแนะนำ DNA เข้าสู่เซลล์อื่นเป็นที่รู้จักกันว่าการเปลี่ยนแปลงซึ่งแบคทีเรียได้รับการรักษาด้วยสารเคมีที่ทำให้พวกเขามีแนวโน้มที่จะใช้ DNA ต่างประเทศมากขึ้นอีกเทคนิคหนึ่งที่เกี่ยวข้องกับการทำให้แบคทีเรียตกตะลึงกับกระแสไฟฟ้าสิ่งนี้เรียกว่า electroporation

เหตุผลในการสร้างพลาสมิด recombinant แตกต่างกันไปบ่อยครั้งที่ DNA ถูกแยกออกจากเนื้อเยื่อหรือสิ่งมีชีวิตครั้งแรกมันจะถูกเปลี่ยนเป็นพลาสมิดเพื่อสร้างห้องสมุดจากนั้น DNA สามารถสกัดได้จากแต่ละอาณานิคมถัดไปสามารถคัดกรองโดยการจัดลำดับดีเอ็นเอเพื่อกำหนดประเภทของยีนที่มีอยู่หากลำดับมีอยู่ในฐานข้อมูลบางครั้งยีนที่มีฟังก์ชั่นที่ไม่รู้จักถูกโคลน

ในกรณีอื่น ๆ ผลิตภัณฑ์ยีนเป็นที่รู้จักกันดี แต่นักวิจัยต้องการแสดงจำนวนมากสำหรับการศึกษาต่อไปยีนสามารถโคลนเป็นพลาสมิด recombinant ที่เป็นเวกเตอร์การแสดงออกมากเกินไปพวกเขาได้รับการออกแบบโดยเฉพาะเพื่อผลิต RNA หรือโปรตีนจำนวนมากสิ่งนี้มีค่าเป็นพิเศษสำหรับโปรตีนของมนุษย์ recombinant ซึ่งก่อนหน้านี้มักจะมีเฉพาะจากศพเท่านั้นทำให้ยากที่จะศึกษาการทำงานของยีนเฉพาะ

ปัจจัยหลายอย่างที่เกี่ยวข้องในการสร้างพลาสมิดที่สามารถใช้ในการโคลนโมเลกุลพลาสมิดต้องมีเครื่องหมายที่เลือกได้สิ่งนี้ทำให้สามารถเลือกเซลล์ที่มียีนได้โดยปกติแล้วประชากรของเซลล์ที่ขาดยีนที่มีเครื่องหมายจำนวนเซลล์ที่มีจำนวนมากโดยทั่วไปพลาสมิด recombinant มีความต้านทานต่อยาปฏิชีวนะหรือสามารถเติบโตได้ในกรณีที่ไม่มีกรดอะมิโนโดยเฉพาะ

พลาสมิดเช่นนี้ต้องการต้นกำเนิดของการจำลองแบบเพื่อให้สามารถเริ่มสังเคราะห์ DNA recombinantนอกจากนี้พลาสมิด recombinant ต้องการชุดของลำดับพิเศษเพื่อให้เอนไซม์ จำกัด การแยก DNA เพื่อให้ยีนถูกแทรกเข้าไปในเวกเตอร์โคลนมีเอนไซม์ จำกัด จำนวนมากที่มีความเชี่ยวชาญสูงสำหรับลำดับดีเอ็นเอที่เฉพาะเจาะจงที่ต้องมีอยู่ที่ยีนเริ่มต้นและสิ้นสุด

สายพันธุ์ดั้งเดิมของแบคทีเรียถูกนำมาใช้สำหรับการโคลน DNA มานานหลายทศวรรษนอกจากนี้ยังมีชุดใหม่ที่ใช้แบคทีเรียที่สร้างขึ้นเป็นพิเศษเพื่ออำนวยความสะดวกในการแสดงออกของผลิตภัณฑ์ยีนพวกเขารวมเทคโนโลยีสำหรับการโคลนยีนด้วยวิธีการที่ช่วยให้การทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนที่แสดงจากยีนเมื่อมันถูกโคลนลงในพลาสมิด recombinant