Skip to main content

โพลีอะคริลาไมด์คืออะไร?

  • Abner

โพลีอะคริลาไมด์เจลเป็นสารละลายที่ใช้กันทั่วไปในอิเล็กโตรโฟรีซิสกระบวนการแยกโมเลกุลหรืออนุภาคขนาดต่าง ๆ โดยผ่านพวกมันผ่านเจลและใช้กระแสไฟฟ้า มีสูตรที่แตกต่างกันสำหรับเจลโพลีอะคริลาไมด์ แต่โดยทั่วไปจะประกอบด้วยอะคริลาไมด์, น้ำ, บัฟเฟอร์, แอมโมเนียมซัลเฟต (APS) และ tetramethylethylenediamine (TEMED) เจลนี้ทำหน้าที่เป็นเมทริกซ์ที่แยกสารประกอบตามประจุและขนาด อะคริลาไมด์ที่มากขึ้นในสารละลายเจลจะแยกโมเลกุลที่เล็กกว่าออกได้ดีกว่า โดยทั่วไปแล้วเจลนี้ใช้สำหรับการแยกโปรตีนและ DNA

ในอิเล็กโตรโฟรีซิสสนามไฟฟ้าทำให้อนุภาคที่มีประจุเคลื่อนที่ผ่านเจลซึ่งทำหน้าที่เหมือนตะแกรงเพื่อแยกอนุภาคขนาดต่าง ๆ ออกไป เจลจะดูดซับความร้อนที่เกิดจากกระแสไฟฟ้า โพลีอะคริลาไมด์เจลมักใช้ในขั้นตอนเหล่านี้ แต่ agarose ซึ่งเป็นสารเคมีอื่นที่สร้างเจลที่คล้ายกันก็สามารถใช้ได้เช่นกัน

เจลสามารถทำจากความเข้มข้นที่แตกต่างกันกับปริมาณของอะคริลาไมด์ตั้งแต่ประมาณ 6% ถึง 15% เมื่อผสมเจลอะคริลาไมด์จะไม่มีการทำโพลีเมอร์หมายความว่ามันยังคงเป็นโมเลกุลเดี่ยว การเพิ่มสารเคมีอื่น ๆ ที่ส่งเสริมการจับเช่น TEMED ทำให้โมเลกุลเชื่อมโยงกันกลายเป็นโซ่ยาว - ส่วน "โพลี" ของโพลีอะคริลาไมด์

ข้อได้เปรียบหลักของโพลีอะคริลาไมด์เจลคือจำนวนของพันธะเชื่อมโยงและความแข็งสามารถควบคุมได้ตามจำนวนอะคริลาไมด์และ TEMED ที่เพิ่มเข้ามา ปัจจัยหลักในความเข้มข้นของอะคริลาไมด์คือขนาดของโมเลกุลที่วิเคราะห์ อะคริลาไมด์ก็จะยิ่งมีความจำเป็นมากขึ้น อนุภาคขนาดเล็กมากจะถูกแยกออกโดยใช้ความเข้มข้นสูงสุด 15 เปอร์เซ็นต์

อะคริลาไมด์ทำงานโดยควบคุมปริมาณแรงเสียดทานในเจล ความแข็งของเจลจะกำหนดปริมาณของแรงเสียดทาน สารประกอบที่มีขนาดใหญ่จะเคลื่อนที่ผ่านเจลช้ากว่าเนื่องจากมีแรงเสียดทานหรือความต้านทานมากกว่าเนื่องจากขนาดของมัน สารประกอบขนาดเล็กจะเคลื่อนที่เร็วกว่าเนื่องจากมีแรงเสียดทานน้อยกว่า เพื่อป้องกันไม่ให้สารประกอบขนาดเล็กเคลื่อนที่ออกจากเจลอะคริลาไมด์จะถูกเพิ่มเข้าไปเพื่อสร้างแรงเสียดทาน

DNA polyacrylamide gel ถูกใช้เพื่อแยกสายดีเอ็นเอที่มีความยาวต่างกัน ชิ้นส่วนของ DNA จะแยกจากนิวคลีโอไทด์เพียงเล็กน้อยซึ่งเป็นสารประกอบที่ประกอบกันเป็นเกลียวแต่ละเส้น เพื่อที่จะรู้ว่าชิ้นส่วนใดที่อ้างถึงขนาดเฉพาะมาตรฐานที่มีชิ้นส่วนขนาดที่รู้จักนั้นมักจะถูกเรียกใช้พร้อมกับตัวอย่าง จากนั้นชิ้นดีเอ็นเอจะถูกเปรียบเทียบกับมาตรฐานและขนาดของเกลียวคลื่นจะถูกกำหนด

ขั้นตอนที่คล้ายกันนี้ใช้เพื่อกำหนดขนาดของโปรตีนซึ่งส่วนใหญ่มักอยู่ในเลือด เลือดประกอบด้วยโปรตีนสองประเภทหลัก: โกลบูลิน, โปรตีนขนาดใหญ่และเซรั่มอัลบูมินซึ่งเป็นโปรตีนขนาดเล็กที่มีประจุลบ การแยกโดยใช้โพลีอะคริลาไมด์เจลจะใช้ในการกำหนดปริมาณของแต่ละประเภท