polyacrylamide gel คืออะไร?

polyacrylamide gel เป็นสารละลายที่ใช้กันทั่วไปในอิเล็กโทรโฟเรซิสกระบวนการแยกโมเลกุลหรืออนุภาคที่มีขนาดต่างกันออกไปโดยผ่านเจลและใช้กระแสไฟฟ้ามีสูตรที่แตกต่างกันสำหรับเจล polyacrylamide แต่โดยทั่วไปแล้วจะมีอะคริลาไมด์, น้ำ, บัฟเฟอร์, แอมโมเนียม persulfate (APS) และ tetramethylethylenediamine (TEMED)เจลนี้ทำหน้าที่เป็นเมทริกซ์ที่แยกสารออกตามประจุและขนาดยิ่งอะคริลาไมด์ในสารละลายเจลมากเท่าไหร่การแยกโมเลกุลขนาดเล็กก็จะยิ่งดีขึ้นเท่านั้นโดยทั่วไปเจลนี้จะใช้สำหรับการแยกโปรตีนและดีเอ็นเอ

ในอิเล็กโทรโฟเรซิสสนามไฟฟ้าทำให้อนุภาคที่มีประจุเคลื่อนที่ผ่านเจลซึ่งทำหน้าที่เหมือนตะแกรงเพื่อให้อนุภาคขนาดต่าง ๆ แยกออกจากกันเจลจะดูดซับความร้อนใด ๆ ที่เกิดจากกระแสไฟฟ้าเจล Polyacrylamide มักใช้ในขั้นตอนเหล่านี้ แต่ agarose ซึ่งเป็นสารเคมีอื่นที่สร้างเจลที่คล้ายกันสามารถใช้งานได้

เจลสามารถทำจากความเข้มข้นที่แตกต่างกันด้วยปริมาณอะคริลาไมด์ตั้งแต่ประมาณ 6% ถึง 15%เมื่อผสมเจลอะคริลาไมด์จะไม่ได้รับการคัดเลือกซึ่งหมายความว่ามันยังคงเป็นโมเลกุลเดี่ยวการเพิ่มสารเคมีอื่น ๆ ที่ส่งเสริมการผูกมัดเช่น temed ทำให้โมเลกุลเชื่อมโยงเข้าด้วยกันสร้างโซ่ยาว mdash;โพลีส่วนหนึ่งของโพลีอะคริลาไมด์

ข้อได้เปรียบหลักของ polyacrylamide gel คือจำนวนพันธบัตรการเชื่อมโยงและความแข็งสามารถควบคุมได้ตามปริมาณเริ่มต้นของอะคริลาไมด์และ temed ที่เพิ่มเข้ามาปัจจัยหลักในความเข้มข้นของอะคริลาไมด์คือขนาดของโมเลกุลที่วิเคราะห์ยิ่งสารประกอบเล็กลงแยกออกก็จำเป็นต้องมีอะคริลาไมด์มากขึ้นเท่านั้นอนุภาคขนาดเล็กมากจะถูกแยกออกโดยใช้ความเข้มข้นสูงสุด 15 เปอร์เซ็นต์

acrylamide ทำงานโดยการควบคุมปริมาณของแรงเสียดทานในเจลความแข็งของเจลกำหนดปริมาณของแรงเสียดทานสารประกอบที่มีขนาดใหญ่จะเคลื่อนที่ผ่านเจลช้ากว่าเนื่องจากมีแรงเสียดทานหรือความต้านทานมากกว่าตามธรรมชาติเนื่องจากขนาดของพวกเขาสารประกอบเล็ก ๆ เคลื่อนที่เร็วขึ้นเนื่องจากมีแรงเสียดทานน้อยกว่าเพื่อป้องกันไม่ให้สารประกอบเล็ก ๆ เคลื่อนตัวออกจากเจลจะมีการเพิ่มอะคริลาไมด์มากขึ้นเพื่อสร้างแรงเสียดทานมากขึ้น

เจลโพลีอะคริลาไมด์ DNA จะใช้ในการแยกเส้นดีเอ็นเอที่มีความยาวแตกต่างกันชิ้นส่วนของ DNA จะแยกออกจากนิวคลีโอไทด์เพียงตัวเดียวสารประกอบที่ประกอบขึ้นเป็นแต่ละเส้นเพื่อที่จะรู้ว่าชิ้นส่วนใดอ้างถึงขนาดเฉพาะมาตรฐานที่มีชิ้นส่วนที่มีขนาดที่รู้จักมักจะทำงานพร้อมกับตัวอย่างจากนั้นชิ้นส่วน DNA จะถูกนำมาเปรียบเทียบกับมาตรฐานและขนาดของเส้นจะถูกกำหนด

ขั้นตอนที่คล้ายกันใช้เพื่อกำหนดขนาดของโปรตีนส่วนใหญ่มักจะอยู่ในเลือดเลือดมีโปรตีนหลักสองชนิด: Globulin โปรตีนขนาดใหญ่และซีรั่มอัลบูมินโปรตีนขนาดเล็กและมีประจุลบการแยกโดยใช้เจล polyacrylamide ใช้เพื่อกำหนดปริมาณของแต่ละประเภท